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化學成分明確的iPSC無血清培養基，產品性能良好，細胞連續穩定傳代，仍能保持其干性。
本產品用于培養經過重編程誘導成的人多能干細胞(hiPSC)，并能夠連續傳代，保持其干性。成分明確，培養時不需添加任何額外成分（Y27632除外）。支持隔天補液。本培養基用于培養經過重編程誘導成的人多能干細胞,并能夠連續傳代,保持其干性。細胞株描述:細胞購自中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫 (SCSP-1301 ) ,細胞代數為17代。
【產品優勢】
1、化學成分明確的無血清培養基，用于hiPSC的體外擴增和長期培養；
2、配方經過科學優化，采用熱穩定型細胞因子，緩沖體系更強；
3、支持隔天換液，可實現單細胞傳代，操作簡便，適用性強；
4、擴增性能更優，支持超過50代的無滋養層培養，細胞核型無異常、無明顯分化現象。
【產品性能】
1.復蘇后轉移至此培養基中能夠連續穩定傳 35代以上。
2.細胞傳代時間為3~ 5 天。
3.細胞表型:TRA-1-60290%, OCT42 95%。
4.細胞形態:
形狀: 圓形或橢圓形, 邊界清晰, 邊緣光滑
厚度:集落呈扁平但略微隆起的二維結構, 中央稍厚。
外觀:在顯微鏡下呈 "鵝卵石 "狀, 細胞密集排列。
【產品使用所需要的試劑耗材】
產品名稱 | 品牌貨號 |
ipsc無血清培養基套裝 | YOCON/NC0401、NC0401.S |
stemproTMAccutaseTM細胞解離試劑 | Thermo/A11 10501 |
ip sc無血清凍存液 | YO CON/NC0603 |
DPBS(不含鈣鎂離子 ) | YOCON/BS0402 |
DMEM/F12 | YO CON/NC0406 |
Y27632 | MCE/HY-10583 |
Mat riGel | corning/354277 |
另需細胞培養板 /瓶 /皿, 15mL離心管和移液管等細胞培養耗材。 | |
2.試劑準備
培養基配制:
溫下預溫 20~30min, 時間不宜過長, 切勿強光或紫外照射。
ipsc完培養基2~8℃可避光保存半個月, 由于蛋白在溶液中易降解, 所以最好 1 周內用完。科研小量、多次使用時,建議添加劑融化后立即分裝(添加劑出廠后僅允許凍融一次) 。完培養基配制完成后, 減少預溫次數,根據需求可提前進行分裝。
Matrigel工作液配制和包被:
根據康寧的批次報告進行分裝。分裝后的小包裝可在 -80℃下最多儲存6個月。
取出一份基質膠加入到36 mL的DMEM/F12 中, 包被四個 6 孔培養板 (1.5mL/孔) 。
(1) 將一份基質膠從 -80℃取出, 在4℃冰箱中的冰上解凍, 直到成為液體 (同時預冷移液管或槍頭) 。
(2)將裝有 36mL的 DMEM/F12培養基的離心管插入冰中 (包被過程中保持低溫,避免因局部溫度過高凝固而影響包被質量) 。
(3) 吸取 1mL預冷 DMEM/F12 加入含有基質膠的小管中, 移液槍吹打混勻 20 次后, 吸入到預冷培養基 (50mL離心管)中,移液管吹打混勻 20次。
(4)立即用稀釋后的基質膠溶液包被 6 孔板。
(5)包被后, 需在 37℃細胞培養箱中放置 1小時, 可立即使用。如果不立即使用,將6孔板用封口膜封好后,放入4℃冰箱中最多儲存7天。如果基質膠溶液并未全覆蓋表面, 則無法實現最佳的 IPSC培養; 因此, 不建議使用含有溶液已蒸發區域的培養板。
(6) 使用時, 輕輕地將培養板向一個角落傾斜, 吸取包被液上清, 注意不要碰到底面包被好的基質膠。 立即加入培養基和細胞。如果已將培養板在4℃下儲存,在使用之前, 還需將培養板在培養箱 (37℃ )下放置 30~60分鐘。
配制Y27632溶液:
Y27632粉末溶解, 配成濃度為10mM的儲存液。分裝后冷凍于 -20℃, 6個月 內使用。
Y27632提高復蘇和傳代后的存活率和克隆形成率, 所以只在復蘇步驟和傳代步驟添加, 推薦添加的終濃度為10M,換液后不再添加且換液時長不宜超過24小時。
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