1. 準備工作液：

1）工作液D：取1份PF00011-A（Foxp3 / 轉錄因子固定/破膜濃縮液 4X）和3份PF00011-B（Foxp3 / 轉錄因子固定/破膜稀釋液 1X）進行混合，混勻后備用。

2）工作液F：取1份PF00011-C（流式細胞術破膜緩沖液 10X）和9份超純水混勻后，制備成流式細胞術破膜緩沖液（1X）備用。

2. 按照Proteintech的細胞表面流式細胞術的實驗步驟中說明進行細胞表面染色。（如不需要進行細胞表面染色，略過此步驟。）

3. （表面染色后，洗滌，棄上清）每1 x 10^6/cells的EP管中加入1 mL工作液D，緩慢吹打以確保細胞重懸。在室溫下避光孵育45分鐘。

4. 在室溫下以 400-600g 離心5分鐘，棄上清，向EP管中加入2 mL工作液F，緩慢吹打以確保細胞重懸，400-600g 離心5分鐘，棄上清。

5. 將細胞沉淀重懸于 100 uL 工作液F中，靜置10-15min。

6. 使用抗體推薦用量 如5 uL/Test（或使用工作液F對流式抗體進行預稀釋），避光孵育抗體-細胞混合物30-45min，用于檢測細胞內抗原。

7. 孵育完畢后，每管中加入2 mL工作液F。

8. 在室溫下以400-600g離心試管 5 分鐘，然后棄上清。

9. 每管中加入2 mL工作液F。

10. 在室溫下以400-600g離心試管 5 分鐘，然后棄上清。

11. 將細胞沉淀重懸于加入0.2 mL工作液F中。

12. 在流式細胞儀上采集樣品。